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豬繁殖與呼吸綜合征流行現狀及分子流行病學研究

2019、2020年高藍的比例仍高于類NADC30,2021年起NADC30比例高于高致病性藍耳病,類NADC30毒株已經成為國內主流。

豬繁殖與呼吸障礙綜合征(PRRS)于1987年在美國首次報道,隨后歐洲和亞洲等各地陸續報道了本病的發生。1991年荷蘭學者和美國學者先后分離和確定了本病的病原。

PRRSV為有囊膜的單股正鏈RNA病毒,屬于套式病毒目,動脈炎病毒科,分為兩個基因型:Genotype1和Genotype2。Genotype1也稱為歐洲型,Genotype2也稱為美洲型。美洲型藍耳病病毒按照ORF5序列,分為至少9個譜系(lineage1~9)和37個亞譜系(sublin-eage);Nsp2是PRRSV 中最長且變異程度最大的非結構蛋白,不同PRRSV的Nsp2基因具有顯著的差異,也可作為分類依據。

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一、PRRSV在我國的流行
自20世紀90年代中期在我國發生和流行以來,已經20余年。據田間流行優勢毒株的不同,可大致分為三個階段:經典毒株流行階段(1996-2006年)、高致病性毒株(HP-PRRSV)流行階段(2006-2013年)、類NADC30和高致病性毒株共同流行階段(2013年至今)。
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我國有關PRRS的描述最早見于1995年,代表性的分離毒株分別為CH-1a、BJ-4[1,2,3],均為美洲型毒株。2006 年之后出現的高致病性毒株(HP-PRRSV)給我國養豬業造成了重大危害,代表毒株為JXA1、HUN4。2008年,NADC30毒株首次于美國愛荷華州爆發呼吸系統疾病的豬群中發現,2013年之后,類NADC30毒株開始在我國流行[4]。2014年,類NADC34毒株在美國爆發流行,對美國的養豬業造成巨大損失[5],2017年,張洪亮教授團隊在遼寧省首次檢測到類NADC34毒株,2019-2020年,福建、黑龍江、河南等省份都分離到類NADC34毒株[6,7,8,9]。我國的流行毒株總體分屬于四個譜系:lineage1、lineage3、lineage5、lineage8。目前lineage1(類NADC30毒株等)和lineage8(HP-PRRSV等)是當前田間主要的流行毒株,其中lineage1譜系是當前的優勢譜系。
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二、美國藍耳病譜系研究
美國有專家統計了美國2009-2019年的27875個藍耳病序列,其中PRRSV-2(美洲型)為26853個,占比96.3%,對其中的26831個PRRSV-2序列進行了進一步分析,美國的流行毒株總體分屬于三個譜系:lineage1、lineage5、lineage8,與中國的情況不同,譜系1占據了樣本中的大部分[10]

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三、限制性片段長度多態性(RFLP)分析的原理及應用

藍耳病的RFLP分型是根據酶MluI、HincII和SacII在ORF5限制位點上的酶切模式形成3個數字代碼[11]。基因譜系是基于ORF5分子特征的遺傳進化分析,RFLP是基于ORF5基因的多態性分析。中美兩國在PRRSV分類模式上存在差別,中國以分子特征(Nsp2缺失和ORF5序列比對)分型,美國以RFLP(ORF5)進行分型。以類NADC34為例,當前類NADC34毒株ORF5基因以RFLP1-7-4居多,但同時也存在1-4-4、1-7-2、1-7-3等類型,RFLP 分類方式無法代表具有同一致病特性的一類毒株, RFLP基因分型在深入了解病毒的致病性方面無效,以分子特征(Nsp2缺失和ORF5序列比對)分型更符合當前國內復雜的疾病形式。

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四、類NADC30、類NADC34毒株致病力分析
國內類NADC30毒株CHsx1401在實驗室條件下攻毒,21天內豬只并沒有出現死亡,致病性低于HP-PRRSV毒株[12],類NADC30毒株HNjz15 也得到相似的結果[13]。國內類NADC34致病性:國內類NADC34毒株 HLJDZD32 -1901 對仔豬致病性中等且低于類NADC30 PRRSV[14]。另一個類NADC34毒株ZDXYL-China-2018-1的攻毒實驗證明,與HP-PRRSV株相比,并未引起攻毒豬的死亡,是一種中等毒力毒株。單個毒株或許并不能代表一類病毒的毒力,但以目前國內的實驗結果來推測,各 PRRSV 亞型對仔豬的致病性的排序為:HP-PRRSV>類NADC30 PRRSV>類NADC34 PRRSV。

五、青島易邦實驗室近三年的ORF5基因測序結果分析
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結果分析:

①各個基因型占比情況:2019、2020年高藍的比例仍高于類NADC30,2021年起NADC30比例高于高致病性藍耳病,類NADC30毒株已經成為國內主流。
?②類NADC34檢出情況:2020年檢測到2%類NADC34毒株,2021年檢測到3.33%。可以推測,隨著豬場的復養和國外引種增加,類NADC34毒株的威脅將逐漸增加。
六、歐洲型藍耳病病毒(PRRSV1)在我國的流行情況
1991年,荷蘭學者分離到毒株 Lelystad virus(LV)并完成了全基因組測序15。此后,歐洲多國先后分離到PRRSV1。我國有關歐洲型毒株的研究相對較少,Zhou Z等于2011年分離到四株PRRSV1毒株[16]。Wang X.等從 2011 年的樣本中分離到一株與疫苗毒株 Amervac 核苷酸序列高度同源的 PRRSV1 毒株 GZ11-G1,懷疑與引進疫苗免疫種豬有關[17]。2014年Nan hua Chen等從發病豬的血清里分離到一株Amervac疫苗毒與田間毒株BJEU06-1的重組毒株[18],這提示我們需要加強國外引種的藍耳病監測。

隨著熒光定量PCR等檢測方法的應用,PRRSV1的檢出變得普遍。其中廣東[19]和廣西[20]地區的檢測顯示歐洲型 PRRSV在中國存在擴散,可能會造成該病毒在一定區域內的流行,給養豬場帶來一定的危害。

豬繁殖與呼吸綜合征流行現狀及分子流行病學研究

參考文獻:

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[20] 趙碩,段群棚,何 穎,等 廣西豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染情況調查及其歐洲型毒株ORF5基因變異分析 中國動物傳染病學報 2021-08-27

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